DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 細胞直接PCR裂解液

【單瓶試劑，細胞裂解+PCR一步到位】

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

Viagen Biotech; DirectPCR^® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K蛋白酶K；302-C (301-C)；

產(chǎn)品介紹：

Viagen DirectPCR® DNA Extraction System（DirectPCR^® DNA提取系統(tǒng)）是一種單管系統(tǒng)，用于從小鼠尾巴，耳片，卵黃囊和培養(yǎng)細胞內(nèi)快遞制備DNA。Viagen Biotech, Inc科學家開發(fā)的組分（正在申請）允許用DirectPCR® DNA Extraction System獲得的DNA提取物與基因分型用的基因組PCR兼容。生物樣本的粗提物與許多分子生物學級的試劑比如PCR都難以兼容，部分原因在于粗提物內(nèi)含有抑制劑。DirectPCR^®不僅介導生物樣品的快速裂解，而且含有抑制劑，能夠有效抑制PCR擴增用粗提裂解物中存在的抑制效應(yīng)，同時zui大程度保持釋放出來的基因組DNA的完整性。申請中的DirectPCR^®操作起來，*消除任何溶液轉(zhuǎn)移或開管步驟，根本上節(jié)省了大量時間和精力。

產(chǎn)品特點：

1） 省時：更少的動手時間；尾巴裂解液粗提物即可用于PCR；

2）   省錢：僅需成本的反應(yīng)流程；

3）   安全：無有機試劑；

4）   環(huán)保：更少消耗（有機試劑，管子，槍頭等等）

5）   可靠有效：100%成功率保證高產(chǎn)量

詳細流程：

1）    10cm細胞培養(yǎng)板細胞，使用添加新鮮制備的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR^® Lysis Reagent (Cell) 細胞裂解液重懸細胞。蛋白酶K在DirectPCR^®中穩(wěn)定保存~24h。如果處理少量細胞，會很難稱量蛋白酶K酚末，可直接使用Viagen提供的基因組PCR級的蛋白酶K溶液（Cat#501-PK），使用濃度為0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR^®中加入25-50μl蛋白酶K溶液）。【注意】：若使用小量細胞，可用去離子水稀釋DirectPCR^®高達10倍，然后使用合適更多體積的裂解液用于PCR。見表1，DirectPCR^® Lysis Reagent (Cell) 起始使用條件。

2）   置于旋轉(zhuǎn)雜交爐中，55℃轉(zhuǎn)動管子處理5-6h或直到看不見組織團。若有必要，能過夜裂解樣本，不會影響效率。*裂解至關(guān)重要。要想獲得更具有重復性的結(jié)果，中途搖動一下瓶子以更換管子的位置一次，在處理2-3h之后。

3）   水浴鍋內(nèi)85℃孵育粗提液45min。【可選】于步驟4）前離心10s沉淀毛發(fā)。粗提液可置于-20℃保存1年（或4℃保存1周），不會降低效率。

4）   每50μl PCR反應(yīng)體系加入0.5-1.0μl裂解液。推薦PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。

表1，DirectPCR^® Lysis Reagent (Cell)起始使用條件。

* Lysis using rotation hybridization oven. 

** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted.  Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs.  Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.

訂購信息：Viagen Biotech原裝正品，現(xiàn)貨供應(yīng)，產(chǎn)品銷售到上千家公司和科研單位，包括Merck，Fisher，Gentaur，Cosmo, Applied stemcell, Genetech，pFizer等等。咨詢，，:。

DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

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