NMY51酵母感受態(tài)細(xì)胞
簡(jiǎn)要描述:
NMY51酵母感受態(tài)細(xì)胞:雙膜系統(tǒng)利用NMY51酵母菌,能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行蛋白突變驗(yàn)證或篩庫(kù)實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為TRP1,leu2-3。報(bào)告基因?yàn)镠IS3,ADE2和LacZ。NMY51的選擇性生長(zhǎng)篩選通過(guò)營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因(HIS3,ADE2)進(jìn)行,之后通過(guò)LacZ報(bào)告基因進(jìn)行β-半乳糖分析的定量或半定量篩選,三個(gè)獨(dú)立的報(bào)告基因由不同的啟動(dòng)子調(diào)控,有助于降低假陽(yáng)性幾率。
產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-20
NMY51 Chemically Competent Cell
酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
溫馨提示
見(jiàn)我司(懋康生物)整理的酵母雙雜交(Yeast two-hybrid assay)產(chǎn)品專題。
產(chǎn)品關(guān)鍵詞:
Dualmembrane system 雙膜系統(tǒng);Dualsystems Biotech;Y1HGold;pBT3-STE;pPR3-STE;NMY51;X-α-Gal;Aureobasidin A (AbA);金擔(dān)子素;
產(chǎn)品訂購(gòu):
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
MF2360-1000UL | NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100μl | 290 |
MF2360-5000UL | NMY51 Chemically Competent Cell 酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞 | 50×100μl | 1320 |
產(chǎn)品組分:
組分編號(hào) | 組分名稱 | 保存 | 貨號(hào)(規(guī)格) | |
MF2360-1000UL | MF2360-5000UL | |||
MF2360-A | NMY51 Chemically Competent Cell | -80℃ | 10×100μl | 50×100μl |
MF2360-B | pGADT7 Control Vector (10ng/μl) | -80℃ | 10μl | 10μl |
MF2360-C | Carrier DNA (10μg/μl) | -20℃ | 100μl | 500μl |
MF2360-D | PEG/LiAC Solution | +4℃ | 5ml | 25ml |
產(chǎn)品描述
雙膜系統(tǒng)(Dualmembrane system)是由Dualsystems Biotech公司開發(fā)的專門篩選跨膜蛋白間相互作用的篩選技術(shù),該技術(shù)利用分離的泛素系統(tǒng)直接檢測(cè)天然狀態(tài)下膜蛋白間的相互作用,是目前為止為一用來(lái)檢測(cè)膜蛋白間相互作用的酵母雙雜交系統(tǒng)。
雙膜系統(tǒng)利用NMY51酵母菌,能直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行蛋白突變驗(yàn)證或篩庫(kù)實(shí)驗(yàn)。轉(zhuǎn)化標(biāo)志為TRP1,leu2-3。報(bào)告基因?yàn)?/span>HIS3,ADE2和LacZ。NMY51的選擇性生長(zhǎng)篩選通過(guò)營(yíng)養(yǎng)缺陷報(bào)告基因(HIS3,ADE2)進(jìn)行,之后通過(guò)LacZ報(bào)告基因進(jìn)行β-半乳糖分析的定量或半定量篩選,三個(gè)獨(dú)立的報(bào)告基因由不同的啟動(dòng)子調(diào)控,有助于降低假陽(yáng)性幾率。
雙膜系統(tǒng)的工作原理在于:泛素分子量很小,由76個(gè)氨基酸殘基組成。泛素作為降解信號(hào)分子,能夠連接另一個(gè)蛋白的N端,之后被泛素專一性蛋白酶(ubps)識(shí)別,導(dǎo)致與泛素相連蛋白被酶降解。泛素可人為分成兩個(gè)部分:N端(Nub)和C端(Cub)。首先,將泛素Nub的三位異亮氨酸突變成甘氨酸(Nubi突變?yōu)?/span>NuBG),通過(guò)這種方式Cub的親和力明顯降低,避免Cub和Nub自我結(jié)合或靠近的可能性。其次,Cub與合成的LEXA-VP16轉(zhuǎn)錄激活因子融合成融合蛋白Cub-lexa-vp16。正常情況下,NuBG不與Cub結(jié)合,ubps也不能識(shí)別分離的泛素,轉(zhuǎn)錄激活因子也不會(huì)被切下來(lái)。后,將待測(cè)蛋白分別與NuBG和Cub融合,形成bait融合蛋白(bait-cub-lexa-vp16)和prey融合蛋白(prey-NuBG)。如果bait和prey發(fā)生相互作用,促使NuBG和Cub的相互接近,從而被ubps識(shí)別,導(dǎo)致LEXA-VP16的解離,進(jìn)入核內(nèi),進(jìn)而激活報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄。該系統(tǒng)能使用四種Bait質(zhì)粒:pBT3-N,pBT3-SUC,pBT3-STE,pBT3-C,篩選標(biāo)志是Leu。三種prey質(zhì)粒:pPR3-C ,pPR3-SUC,pPR3-STE,篩選標(biāo)志是Trp。
本品為經(jīng)特殊工藝制備的NMY51酵母菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,用pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個(gè)月。
基因型
MATa, his3Δ200, trp1-901, leu2-3, 112, ade2, LYS2::(lexAop)4-HIS3, ura3::(lexAop)8-lacZ, ade2::(lexAop) 8-ADE2, GAL4
使用方法
1. Carrier DNA于使用前通過(guò)加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài),方法如下:95-100℃ 水浴或金屬浴3min,快速插入冰中,靜置3min。重復(fù)一次。
2. 取100 µl冰上融化的NMY51化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5 µg,單鏈Carrier DNA 10 µl,PEG/LiAc 500µl,用槍吹打幾次充分混勻,30℃水浴30 min(在15min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
3. 之后將管子放42℃水浴15 min(在7.5min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
4. 5000 rpm離心40s棄上清,用400 µl ddH2O重懸沉淀,離心30s棄上清。
5. 用50 µl ddH2O重懸,涂板,放入29℃培養(yǎng)48-96 h。
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貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
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MF2501-200T | Yeast Transformation Kit 酵母轉(zhuǎn)化試劑盒 | 200T |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作,主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本,以誠(chéng)為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
NMY51酵母感受態(tài)細(xì)胞
NMY51酵母感受態(tài)細(xì)胞